液相色譜（HPLC）分析中**保留時(shí)間漂移**屬于常見問題。所謂“保留時(shí)間漂移”，是指在實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)樣條件下，色譜峰的出峰時(shí)間發(fā)生了明顯變化（比預(yù)期早或晚，甚至波動(dòng)不定），這不僅影響定量準(zhǔn)確性，還可能影響定性結(jié)果。以下為造成保留時(shí)間漂移的主要原因總結(jié)：

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## 液相色譜保留時(shí)間漂移的原因

### 1. 流動(dòng)相成分波動(dòng)

- **流動(dòng)相配比變化**：各溶劑比例（如甲醇/水或乙腈/水等）配制不準(zhǔn)確、溶劑隨時(shí)間揮發(fā)或混合不完全，易致極性改變，直接影響保留時(shí)間。

- **緩沖液pH變化**：流動(dòng)相中的緩沖液pH不同，極易影響酸堿性化合物的保留行為。pH有微小變化時(shí)，對(duì)弱酸/胺藥物保留時(shí)間影響尤為顯著。

- **流動(dòng)相老化**：流動(dòng)相長期存放可能發(fā)生成分分解、水分揮發(fā)、吸收CO?等導(dǎo)致配方失衡。

### 2. 流速不穩(wěn)定

- **泵流速波動(dòng)**：泵的機(jī)械故障、進(jìn)樣器密封不良、活塞磨損或空氣進(jìn)入泵體，都會(huì)導(dǎo)致流速不穩(wěn)，進(jìn)而引起保留時(shí)間提前或延后。

- **管路堵塞**：管路或過濾頭部分阻塞，某些流速下降，但儀器未檢測出來。

### 3. 柱溫波動(dòng)

- 色譜柱未放在柱溫箱中，或柱溫箱控溫精度不高/環(huán)境受影響時(shí)，溫度升高會(huì)使分析峰保留時(shí)間縮短，溫度降低則使保留時(shí)間延長。

- 柱溫變化1–2℃，對(duì)大多數(shù)化合物保留時(shí)間都是可檢測變化。

### 4. 柱效及色譜柱本身因素

- **色譜柱老化/污染/損壞**：柱效下降，填料活性下降，導(dǎo)致保留時(shí)間變短或漂移，某些活性點(diǎn)被污染或溶出也會(huì)光學(xué)活性或極性改變。

- **使用新/舊柱未重新平衡**：新?lián)Q柱子或長時(shí)間停用后再用，柱子的活性、溶劑含水量都需重新平衡。

### 5. 進(jìn)樣問題

- **進(jìn)樣量太大或進(jìn)樣溶劑類型與流動(dòng)相不符**：溶劑效應(yīng)影響致峰型異常甚至保留時(shí)間偏移。

- **樣品溶液中污染物或緩沖鹽與流動(dòng)相/柱不兼容**。

### 6. 泵或自動(dòng)進(jìn)樣器維護(hù)不良

- **密封圈老化**：密封不良，小量空氣混入，造成流動(dòng)相輸送異常。

- **進(jìn)樣閥堵塞或泄漏**。

### 7. 系統(tǒng)死體積與管路問題

- 色譜系統(tǒng)存在死體積或管路彎曲、松動(dòng)、連接不良，易引入滯后或緩沖作用，表現(xiàn)為峰位置漂移。

### 8. 檢測器設(shè)置問題

- 檢測器流通池或參數(shù)（如采集啟動(dòng)延時(shí)）設(shè)置不當(dāng)，造成記錄的不一致。

### 9. 儀器及外部環(huán)境變化

- 外界供電波動(dòng)、實(shí)驗(yàn)室空調(diào)/氣溫變化，影響儀器及溶劑溫度。

### 10. 梯度洗脫問題

- 梯度系統(tǒng)管路切換、延遲體積設(shè)置不準(zhǔn)、溶劑比例切換不及時(shí)，均可導(dǎo)致保留時(shí)間與理論不符。

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## 檢查與解決建議

1. 避免人為配液誤差，使用精確的移液和天平。

2. 保證流動(dòng)相新鮮，pH準(zhǔn)確，及時(shí)更換老化流動(dòng)相。

3. 色譜柱使用前后充分平衡（建議平衡30min以上）。

4. 每次實(shí)驗(yàn)充分開啟柱溫箱，維持穩(wěn)定溫度。

5. 定期維護(hù)泵、進(jìn)樣器和管路，杜絕漏液和空氣混入。

6. 使用與流動(dòng)相極性一致或更弱的溶劑溶解樣品。

7. 梯度洗脫注意編程和比例切換同步，泵需定期校準(zhǔn)。

8. 實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)注明環(huán)境溫度和設(shè)備設(shè)定，便于追溯。

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## 實(shí)驗(yàn)中遇到保留時(shí)間漂移，可按上述各條逐一排查，往往能迅速定位原因并解決問題。